無菌室一般是在微生物實驗室內(nèi)專辟一個小房間。可以用板材和玻璃建造。面積不宜過大，約 4 — 5 平方米即可，高 2.5米左右。無菌室外要設(shè)一個緩沖間，緩沖間的門和無菌室的門不要朝向同一方向，以免氣流帶進雜菌。無菌室和緩沖間都必須密閉。室內(nèi)裝備的換氣設(shè)備必須有空氣過濾裝置。

無菌室標準化規(guī)程與驗收規(guī)范。

1.目的

　　本規(guī)程旨在為無菌操作及無菌室的保護一個標準化規(guī)程。

2.適用范圍

　　生測實驗室

3.責(zé)任者

　　QC主管生測員

4.定義

　　無

5.安全注意事項

　　嚴格無菌操作，防止微生物污染；操作人員進入無菌室應(yīng)先關(guān)掉紫外燈。

6.規(guī)程

　　6.1.無菌室應(yīng)設(shè)有無菌操作間和緩沖間，無菌操作間潔凈度應(yīng)達到10000級，室內(nèi)溫度保持在20-24℃，濕度保持在45-60%。凈臺潔凈度應(yīng)達到100級。

　　6.2.無菌室應(yīng)保持清潔，嚴禁堆放雜物，以防污染。

　　6.3.嚴防一切滅菌器材和培養(yǎng)基污染，已污染者應(yīng)停止使用。

　　6.4.無菌室應(yīng)備有工作濃度的消毒液，如5％的甲酚溶液，70％的酒精，0.1％的新潔爾滅溶液，等等。

　　6.5.無菌室應(yīng)定期用適宜的消毒液滅菌清潔，以保證無菌室的潔凈度符合要求。

　　6.6.需要帶入無菌室使用的儀器，器械，平皿等一切物品，均應(yīng)包扎嚴密，并應(yīng)經(jīng)過適宜的方法滅菌。

　　6.7.工作人員進入無菌室前，必須用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在緩沖間更換工作服，鞋，帽子，口罩和手套（或用70%的乙醇再次擦拭雙手），方可進入無菌室進行操作。

　　6.8.無菌室使用前必須打開無菌室的紫外燈輻照滅菌30分鐘以上，并且同時打開凈臺進行吹風(fēng)。操作完畢，應(yīng)及時清理無菌室，再用紫外燈輻照滅菌20分鐘。

　　6.9.供試品在檢查前，應(yīng)保持外包裝完整，不得開啟，以防污染。檢查前，用70％的酒精棉球消毒外表面。

　　6.10.每次操作過程中，均應(yīng)做陰性對照，以檢查無菌操作的可靠性。

　　6 .11.吸取菌液時，必須用吸耳球吸取，切勿直接用口接觸吸管。

　　6.12.接種針每次使用前后，必須通過火焰灼燒滅菌，待冷卻后，方可接種培養(yǎng)物。

　　6.13.帶有菌液的吸管，試管，培養(yǎng)皿等器皿應(yīng)浸泡在盛有5%來蘇爾溶液的消毒桶內(nèi)消毒，24小時后取出沖洗。

　　6.14.如有菌液灑在桌上或地上，應(yīng)立即用5%石碳酸溶液或3％的來蘇爾傾覆在被污染處至少30分鐘，再做處理。工作衣帽等受到菌液污染時，應(yīng)立即脫去，高壓蒸汽滅菌后洗滌。

　　6.15.凡帶有活菌的物品，必須經(jīng)消毒后，才能在水下沖洗，嚴禁污染下水道。

　　6.16.無菌室應(yīng)每月檢查菌落數(shù)。在凈工作臺開啟的狀態(tài)下，取內(nèi)徑90mm的無菌培養(yǎng)皿若干，無菌操作分別注入融化并冷卻至約45℃的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基約15ml，放至凝固后，倒置于30～35℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時，證明無菌后，取平板3～5個，分別放置工作位置的左中右等處，開蓋暴露30分鐘后，倒置于30～35℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時，取出檢查。100級潔凈區(qū)平板雜菌數(shù)平均不得過1個菌落，10000級潔凈室平均不得過3個菌落。如過限度，應(yīng)對無菌室進行消毒，直至重復(fù)檢查合乎要求為止。